實(shí)驗(yàn)室常用離心機(jī)離心的方法
點(diǎn)擊次數(shù)：3276 更新時(shí)間：2015-11-21
實(shí)驗(yàn)室常用離心機(jī)離心的方法
實(shí)驗(yàn)室常用離心機(jī)分離方法不一，適用場(chǎng)合也不盡相同。目前zui主流的離心分離方法主要是差速離心法和區(qū)帶離心法，其實(shí)在實(shí)驗(yàn)室離心技術(shù)制備超離心法一文中有提及兩種離心方法，今天筆者對(duì)這兩種方法的原理及應(yīng)用介紹進(jìn)行補(bǔ)充和完善。
1.差速離心法：許多具有生物活性的生物大分子和亞細(xì)胞器是不穩(wěn)定的，需要低溫高速離心，zui常用的是差速離心法。通過離心后倒出上清液和沉淀分開，把分離出來的上清液再增大轉(zhuǎn)速離心，分離出第二部分沉淀，這樣不斷增大轉(zhuǎn)速，逐級(jí)分離出所需要的物質(zhì)。利用這種方法可以有效地分離大小上差別較大的顆粒，但不能分離大小相似的顆粒，而且所分離出來的組分往往是不均一的，雜有其他種類的顆粒。
2．區(qū)帶離心法：其中又可以分為兩種：速率區(qū)帶離心和等密度速率區(qū)帶離心。
1）速率區(qū)帶離心法：這是將小量懸液放在一平緩的密度梯度液上，用此梯度液來穩(wěn)定顆粒的沉降。由于離心，顆粒離開起始區(qū)帶而移動(dòng)，移動(dòng)的速度是由顆粒的大小、形狀和它們所受實(shí)驗(yàn)室常用離心機(jī)的離心力來決定的。離心一段時(shí)間歷，各種穎粒將按照它們的相對(duì)速度移動(dòng)而各個(gè)分開，成為一系列區(qū)帶。用這種方法我們可以將沉降速度差為20％或者更大的顆粒。
2）等密度區(qū)帶離心法：這是將要分離的顆粒懸液放至密度梯度液上，或者實(shí)際上將顆粒溶于制作梯度的溶液中。通過離心，顆粒或者上浮或者下沉，達(dá)到與它們自己密度相同的液體處在這里它們沒有重量，不管離心多長(zhǎng)時(shí)間，它們?cè)僖膊灰苿?dòng)了。這些顆粒可成為一系列區(qū)帶，每種顆粒在它自己的密度區(qū)。所以，這是一種利用顆粒浮密度的大小分離顆粒大小的方法。使用的介質(zhì)通常是氯化銫（Cscl）和硫酸銫（Cs2SO4）。前者適合于DNA分離，后者適合于RNA分離。這種方法與速率區(qū)帶離心法相比，它有一個(gè)主要的缺點(diǎn)是在離心期間，顆粒不可避免地暴露在高濃度的梯度溶液中，會(huì)引起顆粒的部分損傷，并可能出現(xiàn)相當(dāng)于損傷顆粒的一些額外的區(qū)帶。
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